5'-O-(4,4'-DiMethoxytrityl)-N4-benzoyl-2'-désoxy-5-méthylcytidine-3'- O-(O-2-cyanoéthyl-N,N-diisopropylaMino) phosphoraMidite

Le 5'-O-(4,4'-DiMethoxytrityl)-N4-benzoyl-2'-deoxy-5-Méthylcytidine-3'-O-(O-2-cyanoéthyl-N,N-diisopropylaMino) phosphoramidite est le monomère standard pour l'introduction de résidus 5‑méthyl‑2′‑désoxycytidine dans l'ADN synthétique et les oligonucléotides antisens. Le groupe N4-benzoyle protège l'amine exocyclique de la base cytosine, empêchant les réactions de ramification lors de la synthèse en phase solide. Le groupe 5‑méthyle sur le cycle cytosine augmente la stabilité thermique des duplex formés avec de l'ADN ou de l'ARN complémentaire (ΔTm ≈ +0,5–1,0 °C par modification) et, surtout, réduit le potentiel immunostimulateur des motifs CpG lorsqu'ils sont utilisés dans des vaccins antisens ou à base de CpG. Le 5'-O-(4,4'-DiMethoxytrityl)-N4-benzoyl-2'-deoxy-5-Méthylcytidine-3'-O-(O-2-cyanoéthyl-N,N-diisopropylaMino) phosphoramidite est entièrement compatible avec les cycles de synthèse d'ADN standards (temps de couplage 2 à 3 minutes, activateur tel que le tétrazole ou le DCI) et les conditions de déprotection standards (NH₃ concentré, 55°C, 8 à 16 heures). Le 5'-O-(4,4'-DiMethoxytrityl)-N4-benzoyl-2'-deoxy-5-Méthylcytidine-3'-O-(O-2-cyanoéthyl-N,N-diisopropylaMino) phosphoramidite est également un intermédiaire clé dans la synthèse d'oligonucléotides contenant de l'acide nucléique verrouillé (LNA) lorsqu'il est combiné avec d'autres monomères modifiés. Ce phosphoramidite est fréquemment utilisé dans la fabrication de médicaments antisens approuvés par la FDA et dans des applications de recherche explorant la régulation épigénétique et l'analyse de la méthylation de l'ADN.

Paramètres du produit

Assurance qualité chez Cosperpharm

Chaque lot subit :

● Chromatographie en phase gazeuse (GC) – pureté ≥97,0 %

● Titrage non aqueux – pureté ≥97,0 %

● Indice de réfraction – analyse de confirmation

● RMN ¹H – vérification structurelle

● Apparence – liquide clair incolore à jaune clair à orange clair

Un COA complet, une fiche signalétique (avec des informations complètes sur le SGH) et un certificat d'origine accompagnent chaque expédition.

Conditions de stockage

Conserver le 5'-O-(4,4'-DiMethoxytrityl)-N4-benzoyl-2'-deoxy-5-Méthylcytidine-3'-O-(O-2-cyanoéthyl-N,N-diisopropylaMino) phosphoramidite dans un récipient hermétiquement fermé sous atmosphère inerte (azote ou argon) à –20 °C pour un stockage à long terme. Un stockage à court terme (jusqu'à 3 mois) entre 2 et 8 °C sous dessiccation peut être acceptable mais n'est pas recommandé pour des périodes prolongées. Conserver le récipient au sec, à l'abri de la lumière et à l'écart des agents oxydants forts et des acides. Le composé est très sensible à l’humidité ; ouvrir uniquement en milieu anhydre (boîte à gants ou avec purge argon). Après ouverture, remettre immédiatement le matériel non utilisé à –20°C sous argon.

Durée de conservation : 2 à 3 ans lorsqu'il est stocké à –20 °C dans un récipient scellé et purgé inerte avec un dessicant.

Précautions de manipulation : Utiliser sous sorbonne. Portez des gants en nitrile, des lunettes de sécurité et une blouse de laboratoire. Évitez de générer de la poussière. Se laver les mains après manipulation. Reportez-vous à la FDS pour obtenir des informations complètes sur la sécurité.

Avantages du produit

1. 5‑méthylcytosine pour une stabilité duplex et une résistance aux nucléases améliorées

Le groupe 5‑méthyle sur la base cytosine augmente la température de fusion (Tm) des duplex ADN/ADN et ADN/ARN d'environ 0,5 à 1,0 °C par modification. Cette stabilisation thermique est particulièrement utile dans les oligonucléotides antisens, où une affinité de liaison plus élevée se traduit par une puissance améliorée et une dose requise réduite. Le groupe méthyle confère également une résistance accrue à certaines nucléases.

2. Immunostimulation réduite des motifs CpG

Les dinucléotides CpG non méthylés sont reconnus par le récepteur Toll-like 9 (TLR9) dans les cellules immunitaires humaines, entraînant des effets immunostimulateurs indésirables. L'incorporation de 5‑méthylcytosine dans les motifs CpG (conversion de CpG en 5‑meCpG) supprime la reconnaissance de TLR9, réduisant ainsi la libération de cytokines hors cible dans les applications antisens et siARN. Le 5'-O-(4,4'-DiMethoxytrityl)-N4-benzoyl-2'-deoxy-5-Méthylcytidine-3'-O-(O-2-cyanoéthyl-N,N-diisopropylaMino) phosphoramidite permet cette immunomodulation critique.

3. Compatibilité totale avec la synthèse et la déprotection standard de l'ADN

Le phosphoramidite de 5'-O-(4,4'-DiMethoxytrityl)-N4-benzoyl-2'-désoxy-5-méthylcytidine-3'-O-(O-2-cyanoéthyl-N,N-diisopropylaMino) utilise le même schéma de groupes protecteurs que le phosphoramidite standard de 2′-désoxycytidine (DMT à 5', Bz à N4, CE à 3'), la seule différence étant le substituant 5‑méthyle. Par conséquent, aucune modification des cycles de synthèse, des solutions d’activateur ou des conditions de déprotection n’est requise : il fonctionne de manière transparente sur tous les synthétiseurs d’ADN standards.

4. Essentiel pour les études de méthylation de l’île CpG

Dans la recherche épigénétique, les oligonucléotides présentant des profils 5-méthylcytosine définis sont utilisés comme substrats pour les méthyltransférases, comme standards pour le séquençage du bisulfite et comme sondes pour les protéines de liaison au méthyle. Le 5'-O-(4,4'-DiMethoxytrityl)-N4-benzoyl-2'-deoxy-5-Méthylcytidine-3'-O-(O-2-cyanoéthyl-N,N-diisopropylaMino) phosphoramidite permet aux chercheurs de synthétiser des séquences d'ADN méthylées sur mesure sans méthylation enzymatique, ce qui donne souvent des modèles incomplets ou hétérogènes.

5. Thérapeutiques oligonucléotidiques antisens

Plusieurs médicaments antisens approuvés par la FDA (par exemple, le nusinersen et l'inotersen) contiennent des résidus de 5‑méthylcytosine pour améliorer la stabilité et réduire l'immunogénicité. Le 5'-O-(4,4'-DiMethoxytrityl)-N4-benzoyl-2'-deoxy-5-Méthylcytidine-3'-O-(O-2-cyanoéthyl-N,N-diisopropylaMino) phosphoramidite est le monomère de choix pour la fabrication de tels produits thérapeutiques à l'échelle commerciale.

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