Technologie de fond
Le cagrilintide est un nouvel analogue de l'amyline acylée à action prolongée. En tant qu'agoniste non sélectif du récepteur de l'amyline (AMYR) et du récepteur couplé aux protéines de la calcitonine G (CTR), il s'agit d'un polypeptide cyclique composé de 38 acides aminés. Sa séquence contient 38 acides aminés et une paire de liaisons disulfure. Le cagrilintide peut réduire considérablement le poids corporel et la prise alimentaire, et présente un potentiel dans la recherche sur l'obésité. L'amyline est une autre hormone liée à la faim et à la satiété en dehors de la voie de signalisation GLP-1.
Le cagrilintide peut réduire l'apport énergétique, réguler les choix et préférences alimentaires, exercer un effet régulateur du glucose en étant co-sécrété avec l'insuline, inhiber la libération postprandiale de glucagon et retarder la vidange gastrique. Il présente des avantages évidents dans le traitement du diabète, de l'obésité, du syndrome métabolique, des maladies cardiovasculaires et d'autres aspects, et présente de larges perspectives de demande et d'application.
Formule chimique développée du cagrilintide
Informations de base
AnglaisNje suis：Cagrilintide
Numéro d'entreprise：GT-F064
CAS：1415456-99-3
Sséquence：γ-Glu-Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Glu-Phe-Leu-Arg-His-Ser-Ser-Asn-As n-Phe-Gly-Pro-Ile-Leu-Pro-Pro-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Pro-NH2 (Disulfurebridge: cys4-cys9)
MmoléculaireFormule：C194H312N54O59S2
MmoléculairePoids：4409.01
Matières premières utilisées pourCagrilintide
Itinéraire synthétique
Schéma de préparation du cagrilintide
(1)Préparation deCagrilintideRésine peptidique
Prendre 1,5 mmol du premier acide aminé protégé et 1,5 mmol de HOBT, dissoudre avec une quantité appropriée de DMF et refroidir à 0~15°C ; prenez encore 1,5 mmol de DIC, ajoutez-le lentement à la solution DMF de l'acide aminé protégé sous agitation et remuez la réaction pendant 10 minutes à 0 ~ 15°C pour obtenir une solution d'acide aminé protégé activée, qui est mise de côté.
Prélever 0,5 mmol de résine aminée (degré de substitution 0,42 mmol/g), le gonfler avec une solution de DMF pendant 60 minutes, le déprotéger avec une solution Pip/DMF à 20% pendant 30 min, laver et filtrer pour obtenir la résine à faire réagir.
Ajouter la première solution activée d'acide aminé protégé à la résine à réagir, effectuer la réaction de couplage à 25~35℃ pendant 120~300 minutes, filtrer et laver pour obtenir la résine contenant 1 acide aminé protégé : Fmoc-Pro-Resin
En utilisant la même méthode que ci-dessus, accédez séquentiellement aux 2e au 38e acides aminés ou fragments protégés correspondants mentionnés ci-dessus.:Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Val-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Île-OH，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Phe-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Ala-OH·H2O，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Gln(Trt)-OH，Fmoc-Ala-Thr(psi(Moi,Moi)pro)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Ala-Thr(psi(Moi,Moi)pro)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Glu-OtBu，Eicosanedioate de mono-tert-butyle, donnant 4,98 g de résine peptidique de carmegliptine
(2)Préparation du brutCagrilintide peptide linéaire
Prenez 4,49 g de résine peptidique de carfilzomib, ajoutez la solution mélangée de TFA, le rapport de la solution mélangée est TFA : EDT/Tis/phénol/H₂O = 87,5 : 2,5 : 5 : 2,5 : 2,5 et le dosage est de 8 ml par gramme de résine ; agiter la réaction à 20 ~ 30 ° C pendant 3 heures, filtrer le mélange réactionnel avec un entonnoir à noyau de sable, collecter le filtrat, laver la résine avec une petite quantité de TFA 3 fois, combiner les filtrats, ajouter du MTBE pour la précipitation, laver le précipité avec du MTBE 3 fois et pomper pour sécher pour obtenir une poudre blanc cassé, qui correspond à 2,08 g de peptide de carfilzomib linéaire brut.
(3)Préparation d’une solution brute de peptide cyclique Cagrilintide
Prendre 0,50 g de brut linéaireCpeptide d'agrilintide, préparer une solution peptidique linéaire brute à une concentration de 5,0 mg/ml, ajouter 5 ml de solution de DMSO goutte à goutte sous agitation et réagir à 20 ~ 30 ℃ pendant 20 h pour obtenir une solution peptidique de cagrilintide cyclique brute.
(4)Préparation de raffinéCpeptide agrilintide
Prends le brutCsolution de peptide cyclique d'arraglitide et filtrez-la avec une membrane filtrante microporeuse mixte de 0,45 μm；
Purifier et préparer par chromatographie liquide haute performance, et collecter leCfractions d'arragliptine；
La chromatographie liquide haute performance a été utilisée pour l'échange de tampon. Le pic principal après échange de tampon a été collecté et sa pureté a été détectée par chromatographie liquide analytique. Les principales solutions de pic après échange de tampon ont été combinées, concentrées sous pression réduite pour obtenir une solution aqueuse de carbotide d'acide acétique, qui a été lyophilisée pour obtenir 152,18 mg de carbotide raffiné avec une pureté de 99,58 %, une impureté unique maximale de 0,09 %, un rendement total de 31,87 % et un poids moléculaire de 4409,0.
HPLC diagramme
Diagramme MS
Les exemples ci-dessus montrent que, par rapport au processus de synthèse par couplage étape par étape, le produit obtenu par le procédé proposé par la présente invention a une pureté supérieure à 99,0 %, et chaque impureté est inférieure à 0,1 %, ce qui améliore la qualité du produit et le rendement total. Le procédé est simple et facile à contrôler, présente un degré élevé d'industrialisation et présente une valeur pratique et des perspectives d'application étendues.
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