Présentation et préparation de l'acétate d'icatibant

Aperçu

L'acétate d'icatibant est un traitement spécifique de l'angiome hémangioïde (AOH) développé par Shire, qui a reçu l'approbation de la FDA le 25 août 2011, pour la prise en charge des épisodes aigus d'angio-œdème héréditaire chez les adultes âgés de 18 ans et plus. C'est également le troisième médicament approuvé par la FDA pour traiter les crises d'AOH. L'acétate d'icatibant possède une structure similaire à celle d'un d-décapeptide de type bradykinine, mais contient cinq acides aminés non dérivés de protéines. Il agit comme un antagoniste compétitif puissant et sélectif des récepteurs de la bradykinine de type 2 (B2), soulageant l'enflure locale, l'inflammation et la douleur associées aux épisodes d'AOH en inhibant les effets de la bradykinine. L'AOH ne représente qu'une des nombreuses indications potentielles pour lesquelles l'icatibant peut être indiqué ; d'autres applications potentielles incluent l'asthme, la cirrhose du foie et d'autres types d'angio-œdème. Par conséquent, l’acétate d’icatibant présente une valeur thérapeutique significative et de larges perspectives de marché.

Formule de structure chimique deAcétate d'icatibant

EessentielIinformations

Nom chinois :醋酸艾替班特

Nom anglais : Acétate d’icatibant

Identifiant de l'entreprise：GT-F005

CAS：138614-30-9；130308-48-4

Snuméro de série：HD-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH   

Mformule moléculaire：C59H89N19O13S

Mpoids moléculaire：1304.52

Acétate d'icatibant Spectre MS

Itinéraire synthétique

1 : Préparation de la résine Fmoc-Arg(Pbf)-CTC

Ajouter 11,1 g de résine de 2-chlorotriphénylméthylichlorure avec un taux de substitution de 0,9 mmol/g à la colonne de réaction en phase solide, suivi de l'ajout de résine gonflée au DMF pendant 30 minutes. Ajouter 3,50μL de DIPEA à 12,98 g de Fmoc-Arg(Pbf)-OH et activer pendant 5 minutes ; ajoutez ensuite la résine gonflée au DMF et laissez le mélange atteindre l'équilibre après 10 minutes. Ajoutez encore 3,50μL de DIPEA, réagir à température ambiante pendant 45 minutes, et enfin sceller avec du méthanol pendant 20 minutes. Évaporer le mélange réactionnel, laver trois fois avec du DMF, trois fois avec du DCM, puis contracter trois fois avec du méthanol pendant 3 minutes, 5 minutes et 8 minutes respectivement, ce qui donne une résine Fmoc-Arg(Pbf)-CTC avec un taux de substitution mesuré de 0,5 mmol/g.

2：Couplage de Fmoc-OCI-OH

Peser 10 mmol de résine Fmoc-Arg (Pbf)-CTC et l'ajouter à un réacteur en phase solide, le gonfler dans du DMF pendant 0,5 h, puis retirer la protection Fmoc deux fois à l'aide d'une solution DBLK à 20 % pendant 10 min et 5 min respectivement ; après lavage, conjuguez-le avec Fmoc-Oic-OH. Dissoudre 11,73 g de Fmoc-Oic-OH, 4,9 g de HOBt et 6,1 ml de DIC dans du DCM (une petite quantité de DMF peut être ajoutée pour la solubilisation), activer le mélange dans un bain d'eau glacée pendant 7 min, puis le transférer dans le réacteur en phase solide et réagir à température ambiante pendant 1–2 heures. Le point final de la réaction est déterminé par la méthode à l'indantrone. Une fois terminé, aspirez le mélange réactionnel, lavez avec du DMF, retirez la protection Fmoc deux fois en utilisant une solution DBLK à 20 % pendant 10 min et 5 min respectivement, lavez à nouveau et préparez le couplage avec l’acide aminé suivant.

3：Couplage de Fmoc-D-Ville-OH

Dissoudre 11,91 g de Fmoc-D-Cit-OH, 5,00 g de HOAt et 11,4 g de HATU dans du DCM (avec une petite quantité de DMF ajoutée pour la solubilisation). Ajouter 3,87 g de DIPEA sous bain d'eau glacée et activer pendant 7 minutes ; puis transférer le mélange dans un réacteur en phase solide et faire réagir à température ambiante pendant 1–2 heures. L'achèvement de la réaction est déterminé par la méthode à l'indiol. Après réaction, retirer le mélange réactionnel, laver au DMF et éliminer la protection Fmoc à l'aide d'une solution DBLK à 20%. Après le lavage, préparez-vous au couplage avec l’acide aminé suivant.

4：Couplage de Fmoc-Ser(tBu)-OH

Dissoudre 11,49 g de Fmoc-Ser(tBu)-OH, 5,00 g de HOAt et 6,1 mL de DIC dans du DCM (avec une petite quantité de DMF ajoutée pour la solubilisation). Après activation sous bain d'eau glacée pendant 7 minutes, transférer le mélange dans un réacteur en phase solide et réagir à température ambiante pendant 1–2 heures ; l'achèvement de la réaction est déterminé par la méthode à l'indiol. Une fois terminé, retirer le mélange réactionnel, laver au DMF, puis éliminer la protection Fmoc à l'aide d'une solution DBLK à 20 %, suivi d'un lavage avant de procéder au couplage avec l'acide aminé suivant.

5：Couplage de Fmoc-Thi-OH

Dissoudre 11,79 g de Fmoc-Thi-OH, 5,00 g de HOBt et 11,37 g de HBTU dans du DCM (avec une petite quantité de DMF ajoutée pour la solubilisation). Ajouter 3,87 g de DIPEA sous bain d'eau glacée et activer pendant 7 minutes ; puis transférer le mélange dans un réacteur en phase solide et laisser réagir à température ambiante pendant 1–2 heures. L'achèvement de la réaction est déterminé par la méthode à l'indiol. Après réaction, retirer le mélange réactionnel, laver au DMF et éliminer la protection Fmoc à l'aide d'une solution DBLK à 20%. Après le lavage, préparez-vous au couplage avec l’acide aminé suivant.

6：Couplage de Fmoc-Gly-OH

Dissoudre 8,91 g de Fmoc-Gly-OH, 5,00 g de HOBt et 9,63 g de TBTU dans du DCM (avec une petite quantité de DMF ajoutée pour la solubilisation). Ajouter 3,63 g de TMP sous bain d'eau glacée et activer pendant 7 minutes ; puis transférer le mélange dans un réacteur en phase solide et laisser réagir à température ambiante pendant 1–2 heures. L'achèvement de la réaction est déterminé par la méthode à l'indanone. Après réaction, retirer le mélange réactionnel, laver au DMF et éliminer la protection Fmoc à l'aide d'une solution DBLK à 20%. Après le lavage, préparez-vous au couplage avec l’acide aminé suivant.

7：Couplage de  Fmoc-Hyp(tBu)-OH

Dissoudre 12,27 g de Fmoc-Hyp(tBu)–OH, 5,00 g de HOAt et 9,66 g de TATU dans du DCM (avec une petite quantité de DMF ajoutée pour la solubilisation). Ajouter 3,63 g de TMP sous bain d'eau glacée et activer pendant 7 minutes ; puis transférer le mélange dans un réacteur en phase solide et faire réagir à température ambiante pendant 1–2 heures. Le point final de la réaction est déterminé par la méthode à l'indiol. Une fois terminé, retirez le mélange réactionnel, lavez avec du DMF et éliminez la protection Fmoc à l’aide d’une solution DBLK à 20 %. Après le lavage, préparez-vous au couplage avec l’acide aminé suivant.

8：Couplage de Fmoc-Pro-OH

Dissoudre 10,11 g de Fmoc-Pro-OH, 5,00 g de HOAt et 11,4 g de HATU dans du DCM (avec une petite quantité de DMF ajoutée pour la solubilisation). Ajouter 3,87 g de DIPEA sous bain d'eau glacée et activer pendant 7 minutes ; puis transférer le mélange dans un réacteur en phase solide et faire réagir à température ambiante pendant 1–2 heures. Le point final de la réaction est déterminé par la méthode à l'indiol. Une fois terminé, retirer le mélange réactionnel, laver avec du DMF et éliminer la protection Fmoc à l'aide de DBLK à 20 %. Après le lavage, préparez-vous au couplage avec l’acide aminé suivant.

9：Couplage de Fmoc-Arg(Pbf)-OH

Dissoudre 19,44 g de Fmoc-Arg(Pbf)-OH, 5,00 g de HOAt et 11,4 g de HATU dans du DCM (avec une petite quantité de DMF ajoutée pour la solubilisation). Ajouter 3,87 g de DIPEA sous bain d'eau glacée et activer pendant 7 minutes ; puis transférer le mélange dans un réacteur en phase solide et faire réagir à température ambiante pendant 1–2 heures. L'achèvement de la réaction est déterminé par la méthode à l'indiol. Après réaction, retirer le mélange réactionnel, laver au DMF et éliminer la protection Fmoc à l'aide d'une solution DBLK à 20%. Après le lavage, préparez-vous au couplage avec l’acide aminé suivant.

10：Couplage de Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH

Dissoudre 19,44 g de Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, 5,00 g de HOAt et 11,4 g de HATU dans du DCM (avec une petite quantité de DMF ajoutée pour la solubilisation). Ajouter 3,87 g de DIPEA sous bain d'eau glacée et activer pendant 7 minutes ; puis transférer le mélange dans un réacteur en phase solide et faire réagir à température ambiante pendant 1–2 heures. Le point final de la réaction est déterminé par la méthode à l’indiolone. Une fois terminé, retirez le mélange réactionnel, lavez avec du DMF, puis utilisez 20 % de DBLK pour éliminer la protection Fmoc. Laver trois fois avec du DMF, trois fois avec du DCM et trois fois avec du méthanol pour la contraction (pendant 3 min, 5 min et 8 min respectivement), suivi d'un séchage sous vide pour obtenir une résine d'acétate de peptide étibant.

Chromatogramme HPLC de l'acétate d'Icatibant

11：Pyrolyse de résine d'acétate d'icatibant

Préparez 200 mL de réactif de lyse contenant 190 mL d’acide trifluoroacétique, 6 mL de triisopropylsilane et 4 mL d’eau, et pré-refroidissez-le au réfrigérateur pendant 30 minutes. Ajouter 20,0 g de résine peptide acétate d’étibant dans un ballon à fond rond de 500 mL, puis ajouter le réactif de lyse préparé de 200 mL à la résine tout en remuant sous un bain de glace et sous flux d’azote. Après 30 minutes de réaction, retirer le bain de glace et poursuivre la réaction à température ambiante pendant 2 heures. Filtrer la résine et récupérer le filtrat. Laver la résine avec une petite quantité d'acide trifluoroacétique, filtrer et combiner les filtrats. Ajouter progressivement le filtrat à 20 L d'éther glacé ; un précipité blanc se forme. Centrifuger à 3 000 tr/min pour recueillir le précipité, laver cinq fois avec de l'éther glacé et sécher sous pression réduite pour obtenir 10,3 g de peptide brut avec une pureté HPLC > 90 %.